Cromatograma

Diagrama donde se representan los resultados de la separación de una mezcla mediante técnicas cromatográficas. En el eje de las ordenadas se representa el valor medido de alguna propiedad física a partir de la cual se ha detectado la presencia de una sustancia, o bien una unidad relativa que la cuantifica (igualmente basada en la medición de alguna propiedad), mientras que en el de las abscisas el tiempo. En la Figura superior se representa un cromatograma con diferentes máximos, cada uno de ellos asociado a la presencia de uno de los componentes de la mezcla original. En la Figura inferior se indica la manera en la que se mide lo que tarda en abandonar al sistema de separación una de estas sustancias tomando como referencia su máximo (lo que se denomina tiempo de retención, t_R), equivalente a la suma del tiempo que tarda en salir del sistema la fase móvil o eluyente (llamado a veces tiempo muerto, t_M) y el tiempo efectivo que es retenido cada componente o eluato (o tiempo de retención corregido, t_R’ o t_S). En inglés: chromatogram.

El cromatograma es gráfico que representa la respuesta del detector en función del tiempo de elución (o volumen de eluyente añadido).

Tipos de cromatograma

Cromatograma diferencial: Es un cromatograma obtenido con un detector diferencial.

Cromatograma integral: Es un cromatograma obtenido con un detector integral.

La cromatografía es un método físico de separación para la caracterización de mezclas complejas, la cual tiene aplicación en todas las ramas de la ciencia; es un conjunto de técnicas basadas en el principio de retención selectiva, cuyo objetivo es separar los distintos componentes de una mezcla, permitiendo identificar y determinar las cantidades de dichos componentes. Diferencias sutiles en el coeficiente de partición de los compuestos dan como resultado una retención diferencial sobre la fase estacionaria y, por tanto, una separación efectiva en función de los tiempos de retención de cada componente de la mezcla.

El significado del cromatograma

Los compuestos eluidos (que han atravesado la fase estacionaria) son transportados por la fase móvil a un detector que los registra en forma de curvas gausianas (forma de campana). Dichos señales se denominan picos y el comjunto de picos y línea base registrados se denomina cromatograma. Hasta aquí la cromatografía ha cumplido su primer cometido, separación de los compuestos de la mezcla pero además, los picos dan información cualitativa y cuantitativa de la mezcla en cuestión:

a) Cualitativa: el tiempo de retención tR es siempre constante bajo condiciones cromatográficas idénticas. Por tanto un pico puede ser identificado por comparación de tiempos de retención.

b) Cuantitativa: el área de un pico es proporcional a la cantidad de muestra inyectada. Como veremos más adelante se puede crear una curva de calibrado a partir de las àreas obtenidas de varias disoluciones de las que conocemos exactamente las concentraciones.

Posteriormente por comparación del àrea de un pico podemos determinar su concentración.