Cromatografía

La cromatografía es un método para la separación de mezclas a base de las diferencias en la velocidad a la que migran sobre o a través de una fase estacionaria.

Método de separación en la que los componentes de una muestra líquida se absorben en diferentes puntos de una superficie sólida.

Nombre que reciben diferentes técnicas de separación y purificación de mezclas de sustancias (a las que se les denomina eluatos), las cuales son sometidas a una migración a través de un lecho conocido como fase estacionaria. Dicha migración es promovida por un gas o un disolvente -la fase móvil o eluyente-, y para conseguir esto, se hace uso de medios físicos como la capilaridad, por gravedad o a presión, lo que induce el desplazamiento; a este proceso se le denomina elución. Ambas fases deben ser químicamente inertes con las sustancias que se están separando, y debe procurarse mantener un flujo de la fase móvil constante a una temperatura controlada para que la separación se pueda llevar a cabo de manera exitosa y reproducible. La separación está basada en las diferentes afinidades que las sustancias a separar poseen con la fase estacionaria y con la móvil, expresadas como concentraciones de saturación al equilibrio en cada una de ellas; su relación define el coeficiente de partición K (v. Figura superior). Como cada sustancia posee un diferente valor de K, su tránsito a través del lecho cromatográfico operará con una diferente velocidad, induciéndose de esta manera la separación (v. Figura inferior). La afinidad de una sustancia por la fase estacionaria depende de diversos factores, entre ellos la polaridad (v.); de esta manera, las sustancias más polares serán retenidas en mayor medida que las no polares si la fase estacionaria es polar (cromatografía de fase normal, v.); la tendencia es la opuesta si la fase estacionaria es no polar (cromatografía de fase inversa o reversa, v.). Algunas otras técnicas aprovechan otras propiedades, como el peso molecular (cromatografía por exclusión de tamaño o de permeación en gel), o la carga eléctrica (cromatografía de intercambio iónico) para llevar a cabo la separación. Los volúmenes que pueden manejarse de la mezcla dependen de la técnica en cuestión: si el objetivo se limita a conocer el número de componentes que la constituyen, la técnica cromatográfica será definida como analítica, y la cantidad a manejar de la mezcla puede ser de un miligramo o menos; en contraste, si se desea separar cantidades ponderables de los eluatos, la técnica a emplear deberá de alcanzar el nivel de preparativa. Véase también cromatografía de gases, cromatografía en capa delgada y HPLC. En inglés: chromatography.